Artemisia artemisinin, ekstraktion, malaria INDHOLD I ARTEMISIEN ANNUA L EXTRACTS MODTAGET AF FORSKELLIGE METODER

INDHOLD AF ARTEMIZININ I ARTEMISIEN ANNUA L EXTRACTS OPFYLDET AF FORSKELLIGE METODER Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, SV Zhshzhitzhapova, LD Padnaeed Buryat State University, st. Smolin, 24a, Ulan-Ude (Rusland) Tomsk State University, 36, Lenina Ave., Tomsk (Rusland) Baikal Institut for Naturforvaltning, Sibirisk Gren af ​​Det Russiske Videnskabsakademi, ul. Sakhyanova, 8, Ulan-Ude (Rusland)

Spørgsmål om isolering af artemisinin fra Artemisia annua L. og dets kvantitative bestemmelse ved anvendelse af HPLC-MS-metoden overvejes. Artemisinin blev isoleret ved forskellige ekstraktionsmetoder: maceration, ultralyd og subkritisk CO2-ekstraktion. Kompositionssammensætningen af ​​CO2 og hexanoekstrakter blev studeret af GC-MS.

introduktion

Artemisinin (1) er et peroxidsesquiterpen [1], som er et stærkt effektivt antimalarielt lægemiddel og en precursor af mere potente forbindelser, såsom artemether, artesunate og nogle andre. Betydningen af ​​artemisinin og dets derivater er baseret på den meget hurtige virkning af en forbindelse af denne type mod dens hovedpatogen Plazmodium falciparum, som også forårsager hjernesygdom. Den kemiske og biokemiske syntese af artemisinin har vist sig at være meget dyr og derfor for tiden uigennemtrængelig som den vigtigste kilde til artemisininproduktion [2].

Malaria er forårsaget af en mikroorganisme - Plasmodium malaria. Der er 4 typer af sådan plasmodium, parasitisk i menneskekroppen: Plazmodium vivax, P. ovale, P. malariae og P. falciparum. I midten af ​​det 20. århundrede var det muligt at reducere antallet af patienter med malaria betydeligt takket være den udbredt anvendelse af kinin og dets derivater. Men siden 60'erne. Malaria fra sidste århundrede mindede igen om sig selv. Dette skyldtes, at malaria Plasmodium (P. falciparum), der var resistent over for quinin, chloroquin, mefloquin og andre kinolinbaserede stoffer, forekom og spredes i andre regioner i Thailand og Sydamerika [3, 4]. Problemet med at finde nye effektive antimalariale lægemidler, blandt hvilke artemisinin blev foreslået, er blevet aktuelt. Denne unikke forbindelse blev opdaget i Kina (det kinesiske navn er qinghaosu). Værkerne blev startet i 1967 og blev kaldt "Program 523" [5]. Det er isoleret fra Artemisia annua Atemisia annua L., som er almindelig i det tidligere Sovjetunionen, som dækker regionerne Altai, Transbaikalia, Amur-regionen, Kasakhstan, Kirgisistan, Usbekistan og Turkmenistan. Malurt er bredt repræsenteret i Kina og andre lande [6]. Den samlede mængde artemisinin isoleret fra forskellige dele af A. annua er ca. 0,01 og 1,4% af den tørre bladmasse [2].

Artemisia annua L. er det vigtigste råmateriale til artemisininproduktion. Verdenssundhedsorganisationen i 2001 anbefalede brugen af ​​artemisinin i første linje behandling for malaria kontrol, hvilket førte til en stigning i området under et år gammel malurt. For det meste dyrkes malurt årligt i Østasien, hovedsagelig i Kina og Vietnam (70% af arealet fra verdens bestande), der for nylig blev introduceret i kultur i østlige og sydlige Afrika (20% af verdens bestande), hvilket giver en fjerdedel af globale sundhedsbehov [7].
Ud over artemisinin er A. annua værdsat for sin æteriske olie, som har en karakteristisk sød, græsagtig aroma og anvendes til parfume og kosmetiske produkter. Derudover har olien antibakterielle egenskaber og kan anvendes til behandling af hudsygdomme. Ud over sesquiterpen lactoner, som har den vigtigste terapeutiske værdi, indeholder de essentielle olier af denne plante en betydelig mængde af komponenter, der har værdi, såsom 1,8-cineoleum, artemisiaalkohol og keton, borneol og andre. også analyseret den fysiologiske virkning af lipofile ekstrakter på huden [2].
I forbindelse med den rige og forskelligartede sammensætning af biologisk aktive stoffer indeholdt i Artemisia annua er søgningen efter nye vækstområder af årligt malurt af stor interesse. I Republikken Buryatia vokser 46 arter af polynum [8], herunder Artemisia annua L. Indholdet af artemisinin i Polen, etårigt, der vokser i Buryatia, er ikke blevet undersøgt tidligere. Formålet med dette arbejde var derfor den kvantitative bestemmelse af artemisinin i ekstrakter opnået ved forskellige ekstraktionsmetoder.

Eksperimentel del

Råmaterialet til undersøgelsen blev udvalgt over jorden del af den polske årlige Artemisia annua L., samlet i det første årti af august 2010 i blomstringsfasen.
Isolering af artemisinin og andre biologisk aktive stoffer (essentiel olie) blev udført under anvendelse af forskellige ekstraktionsmetoder: maceration, ultralydsekstraktion og subkritisk CO2-ekstraktion. Ekstraktion blev udført på laboratorieinstallationer. Hexan, ethylacetat, ethanol og CO2 blev anvendt som ekstraktionsmidler. Data- og ekstraktionsparametrene er vist i tabel 1. Ekstrakter fra bundfaldet blev separeret ved centrifugering i en OP-8UHL4.2 centrifuge ved 5000 omdr./min og derefter filtreret gennem et prøvefiltreringssystem.
Den kvantitative indhold af artemisinin blev bestemt ved HPLC-MS ved anvendelse af et højtydende væskekromatografikvalitet «Finnigan Surveyor», udstyret med autosampler «autosampler Plus» og pumpe «LC Pump Plus», med massselektivnym detektor «LCQ Advantage MAX» (ionfælde) mærke «Finnigan», ioniseringsmetode - elektrospray. Kolonne "Hypersyl Gold" 150 × 4 mm fyldt med silicagel sorbent med C18 podede faser (partikelstørrelse 5 μm), (fremstillet af Thermo Electronic Corporation, USA). Eluering blev udført i isokratisk tilstand (50% (A): 50% (B)), sammensætningen af ​​udgangsbufferen (A) var en vandig opløsning af myresyre (pH = 3) + 2 ml af en mættet opløsning af ammoniumacetat, elueringsbuffer (B) 100% acetonitril. Den volumetriske strømningshastighed for elueringsmiddel er 0,5 ml / min, volumenet af den injicerede prøve (autosampler) er 25 μl. Registrere ioner transporteres i overvågningen af ​​positiv ion-mode (valgt ionovervågning, SIM), med molekulyarnoi vægt 300 (som følge af binding til molekylet af artemisinin NH4 ammonium ion) med et vindue bredde (299-301) m / z. Kvantitativ bestemmelse blev udført under anvendelse af den interne standardmetode under anvendelse af tilstandsstandardprøven fra Sigma.

Ekstraktionsmetoder og parametre

Nr. P / p Ekstraktionsmetode Ekstraktionsmiddel Ekstraktionstid / ekstraktionsparametre Artemisininindhold i% i form af a.s.s.
1 Makering af ethanol 24 timer / råmaterialer: opløsningsmiddelforhold (1: 5) 0,040 ± 0,002
2 Maceration ethanol 48 h / råmaterialer: opløsningsmiddelforhold (1: 5) 0,038 ± 0,002
3 Makering af hexan 24 h / forhold af prøve: opløsningsmiddel (1: 5) 0,039 ± 0,002
4 Ultralydsekstraktion ethanol 15 min / forhold af råmaterialer: opløsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 Hz, T = 25 ° C 0,039 ± 0,002
5 Ultralydekstraktion ethylacetat 15 min / råmaterialer: opløsningsmiddelforhold (1: 5), lydfrekvens 50 Hz, T = 25 ° C 0,022 ± 0,001
6 CO2-ekstraktion so2 24 h / strømningshastighed 30 l / time, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003

Derudover blev de flygtige bestanddele af CO2- og hexanekstrakter undersøgt ved kromatografi-massespektrometri på en Agilent Packard HP 6890 gaskromatograf med en MSD 5973N quadrupol detektor. Vi brugte en 30 meter kvartskolonne TR-5 ms med en indre diameter på d = 0,25 mm, en filmtykkelse på 0,25 μm. Kromatografisk adskillelse blev udført som beskrevet i [9]. Kvalitativt blev komponenterne af ekstrakterne bestemt ved at sammenligne de fulde massespektre med dataene fra biblioteket med chromatografis massespektrometri data af flygtige stoffer af vegetabilsk oprindelse AV Tkachev, biblioteker NIST 08 og Wiley 275. Resultaterne af analysen er vist i tabel 2.

De vigtigste komponenter i CO2 og hexanekstrakter
Peakområde Relativ Tilslutninger Peakområde Relativ
Forbindelser af CO2-ekstrakt hexanekstrakt
CO2-ekstrakt hexanekstrakt
Monoterpenoider langkædede carbonhydrider
Tricycylen 140181 - Tricosane 103969 52288
a-pinene 1155320 - Tricozen-1 1956324 -
Camphene 2021028 - n-Pentacosane 534763 110485
R-pinen 371548 1683858 645634 - - -
n-heptacosan 279800 132358
3-caren

Cycliske carbonhydrider
limonen
Pentacyclo 576196 -
R-phellandren 587143 - [7,5,0,0 (2,8).0 (5,14) 0.
1,8-cineol 133599 - (7.11)] tetradecan
Artemisia ketone 1413437 - 1,8-dimethylphenanthrene 3765681 1080289
Borneol 170158 707945 - - Flyuoren 3507465 319501
Bornyl acetat

diterpenoider
sesquiterpenoider
Methyl-3,5-bis (ethylamino) benzoat 627581 283913
Cariofillen 370714 214560 - -

Karyofillenoxid
Germacren D 214913 -
R-selinene 3053333 328535
a-cadinol 149485 -

Diskussion af resultaterne

Som det fremgår af de data, der er angivet i tabel 1, var det laveste udbytte af artemisinin (0,022%) med ultralydsekstraktion med ethylacetat. Indholdet af artemisinin i ekstrakter isoleret ved ultralydsekstraktion og maceration under anvendelse af forskellige opløsningsmidler (hexan, ethylalkohol) er ikke signifikant anderledes end 0,038-0,040% i form af A. p. Når man insisterer på ethylalkohol malurt årligt i 24 og 48 timer, er indholdet af artemisinin i de opnåede ekstrakter omtrent det samme som henholdsvis 0,040 og 0,038%. Det højeste udbytte af artemisinin (0,054%) blev opnået under den forudkritiske CO2-ekstraktion. Til sammenligning præsenterer vi nogle data om indholdet af artemisinin, i et års malurt, der vokser i forskellige områder. Artemisia annua L., der vokser i forskellige dele af Kina, indeholder fra 0,01 til 0,22% artemisinin. Nogle hybrider af årligt malurt, der dyrkes i Kina og Vietnam, indeholder fra 1,0-1,5% artemisinin [10]. Indholdet af artemisinin i A. annua, der vokser i det tidligere Sovjetunionen, følgende (værdierne er angivet udtrykt lufttørret råvare): Georgian SSR (0,005%), Kirghiz SSR (0,025%), moldoviske SSR (0,01-0,02%), Krasnodar-territoriet (0,04%), ukrainsk SSR (0,005-0,05%), Turkmenistan (0,05% i forhold til a.s.c.), Kasakhstan (0,01-0,05% A.S.S.) [11].
I undersøgelsen af ​​sammensætningen af ​​ekstrakterne af årligt malurt, opnået ved CO2-ekstraktion og maceration, viste hexan som ekstraktionsmiddel, at chromatografi-massespektrometri viste betydelige forskelle i sammensætningen af ​​disse ekstrakter. Monoterpenoider, sesquiterpenoider, langkædede carbonhydrider, cykliske carbonhydrider og diterpenoider detekteres ved massespektrometrimetoden.
Monoterpenoider findes kun i CO2-ekstrakten. Hovedkomponenterne i CO2-ekstrakten er a-pinen, 3-caren, artemisia-keton, (3-selenen, tricozen-1, 1,8-dimethylphenanthren og fluoren.

I hexanekstraktet af malurt ved årlig gaskromatografi-massespektrometri blev primært langkædede carbonhydrider og cykliske carbonhydrider identificeret; 3-selen blev detekteret fra sesquiterpenoider.
Ud over artemisinin, som er af primærmedicinsk værdi, indeholder den essentielle olie et stort antal komponenter af biologisk værdi, såsom artemisiaketon, 1,8-cyneol, borneol osv.

fund

1. Indholdet af artemisinin i forskellige ekstrakter af A. annua (luftdel, blomstringsfase), der vokser på Republikken Buryatias område, blev bestemt af HPLC-MS.
2. Det maksimale artemisininindhold findes i CO2-ekstraktet (0,054% udtrykt i a.s.c.)
3. Ved hjælp af chromatografi massespektrometri blev sammensætningen af ​​den essentielle olie ekstraheret ved forskellige ekstraktionsmetoder undersøgt.

Artemisia annua L.
Taxon beskrivelse

Russiske navne

taksonomi

billede

Planter på kortet

Botanisk beskrivelse

Artemisia annua L. Sp. pl. (1753) 847; Bess. i Nouv. Mem. Soc. Nat. Mosc. III, 81; Dc. Prodr. VI, 119; LDB. Fl. Ross. II, 592; Boiss. Fl. eller. III, 371; Maxim. i Bull. Acad. Sc. Petersb. Viii, 528; Hook. Fl. Br. Ind. III, 323; Com. i fl. Manchu. III, 659; Nakai, Fl. Koreansk. II, 30; Fedch. Adyge. sol. Turk. IV, 200; Rydb. North Am. Fl. 34, del 3, 259; Pampan. i Nuov. Giorn. Bot. Ital. n.s. XXXIV, 637; Hall og Clem. Artem (1923) 102; Com. og alice. Res. sol. Fjernøsten kr. II, 1036; Krasheniny. i fl. syd-øst. Europ. Del USSR, VI, 357; Grossg. Fl. Kavko. IV, 138; Krasheniny. og vinger. Fl. Zap. Sib. XI, 2816; Polyak. i Mayevsky, FL. 586. - A. chamomila Winkl. i Tr. Petersborg Universitet. bot. Have, X, 87; Fedch. op. Op. - Ic.: Amm. Stirp. rar. t. 193, f. 23; GMEL. Fl. sib. II fanebladet. 25. - Exs.: ГРФ № 3152. - Et års malurt.

Årligt. Planten er duftende, grøn, bar eller med spredte, små tilstødende hår med lige, ribbet, brun eller lilla-brunlig stamme 30-100 cm høj. blade er stiplede-fossa-ferruginous, lavere petiolat, 3-5 cm lang. og 2-4 cm bred., oval, tre gange pinnacular, segmenter af den sidste række aflængede, kortspidsede; hele eller med 1-2 tænder, 1-2 mm lange. og 0,5 mm bred; Mellem- og stambladene er dobbelte pinnater, øvre sessile, mindre og mindre komplekse, de øverste skovle er enkle eller med et lille antal laterale lobuler. Korgene er kugleformede, 2-2,5 mm brede, talrige, afvist eller hængende på korte ben, trukket sammen på korte grene i b. m. lang, pyramidal panikblomstring; Indpakningen er glat, de ydre folder er lineært aflange, grønne, indvendige ovale eller næsten runde, med en bred kantet blank kant rundt om kanten; beholder konveks, bar marginale pistillatblomster, 10-20 i antal, kronfiliform, dot-glandular, snævert lineære, stigma-lobes, stump, udsat for et rør; disc blomster er biseksuelle, 12-30 i antal, smal-capped rørformede, nøgne; anthers snævert lineære, øvre appendage langstrakte, akut-vinklede, basale lobes meget kort, spids; kolonnen er kortere end stammerne, stigmatien af ​​stigma er lineær, lige, lidt afvigende, cili ved apex; achenes 0,8-0,6 mm lang., aflange-ovate, fladt, ved toppunktet med en lille afrundet platform, knapt kantet langs margenen. Col. VIII - IX.

I uvejre steder nær boliger, haver, i haver. - Europa. h.: ​​Øvre Dniester., Øvre Dnieper., Volzh. Don., Volga., Lower. Don., Black., Bess., Krim; Kaukasus: Zap.- og East. Trans., Tal., Ons. Asien: Aral-Casp., Balkh., J.-Tarb., Tien-Shan., Syr-Dar., Pam. - Al., Amu-Dar., Horn. Turkmensk. Tot. var.: ons Heb., Srediz., Balk. -Maloaz., Arm.-Kurd., Iran, J.-Kashg., Kit., Jap., Mongoliet, Nord. Amerika (fremmede).

Visningstypen er tegningerne af Amman og Gmelin.

Husholdninger. VAL. Udbyttet af æterisk olie er 0,1-0,64% (ifølge Goryaev). Ifølge Joshikazu Imade (1937) er cineol og substans C10H6O i olien; Dette stof er blevet undersøgt i detaljer af Ashania og Joshitomi (1917); sammen med artemacyaketon blev dets isomer, isoartemisieaceton, fundet i olie. Dette keton var i stand til at isolere fra moderluden, der var tilbage i fremstillingen af ​​artemacyaceton-semicarboson. Seisi Takagi (1928), fortsatte studiet af den japanske A. annua, til de 4 komponenter kendt i olie tilføjet 2 flere nye: cadinene og karyofillen. Baseret på Rutovsky og Vinogradovs forskning (1929) består olien af ​​a-pinen, cyneol, camphene, artemisiaketon og isoartemisieseketon, en lille mængde borneol, eddikesyre og smørsyre, kimunoaldehyd (formodentlig semicarboson) og phenol (sandsynligvis eugenol). En lille mængde alkaloider blev fundet i de underjordiske dele (Lazurievsky, Sadykov, 1939; Massagetov, 1947). Ifølge observationer på marken (Yunatov, 1954), i grønne tilstand, er ikke spist af husdyr. Tilstedeværelsen af ​​alkaloider bekræftes af M.I. Goryaeva, G.K. Kruglykhina, E.I. Satdarova (1959).

Abstract og afhandling om medicin (04/14/02) om emnet: Farmakognostisk undersøgelse af Artemisia annua L. og Artemisia sieversiana Willd. Buryatias flora

Sammendrag af afhandling i medicin om emnet Farmakognostisk undersøgelse af Artemisia annua L. og Artemisia sieversiana Willd. Buryatias flora

Som et manuskript

Soktoeva Tuyana Erdemovna

FARMAKOGNOSTISK FORSKNING ARTEMISIA ANNUA L. OG ARTEMISIA SIEVERSIANA WILLD. FLYORER AF BURYATIEN

04/14/02 - farmaceutisk kemi, farmakognosi

Abstract of dissertation for ph.d.-kandidatets kandidatgrad

Afhandlingsarbejdet blev udført på Forbunds statsbudgettet Uddannelsesinstitution for Højere Erhvervsuddannelse "Buryat State University" af Ministeriet for Uddannelse og Videnskab i Den Russiske Føderation og Etablering af Det Russiske Akademi for Videnskab ved Baikal Institut for Miljøstyring, Sibirisk Gren af ​​Det Russiske Videnskabsakademi

Tilsynsfører: Doctor of Chemical Sciences, Professor

Radnaeva Larisa Dorzhievna

Officielle modstandere: Doctor of Biological Sciences, Professor

Antsupova Tatyana Petrovna

Kandidat i Pharmaceutical Sciences Mongolov Hanhai Purbuevich

Ledende organisation: Perm-stat

Den Russiske Føderations ministerium for sundhed og social udvikling

Forsvaret finder sted den 23. december 2011 kl. 10 ° på Dissertationsrådets møde DM 003.028.02 ved SB RAS Institut for Generel og Eksperimentel Biologi på adressen: 6, Sakhyanova St., Ulan-Ude, 670047.

Afhandlingen er tilgængelig på det centrale videnskabelige bibliotek i Buryat Scientific Center for SB RAS.

Abstrakt udgivet den 22. november 2011.

Videnskabelig sekretær for Dissertation Council kandidat til biologiske videnskaber

GENEREL BESKRIVELSE AF ARBEJDET Relevans af emnet. Planter af slægten Artemisia (malurt) er lovende kilder til biologisk aktive stoffer, såsom malmstamme Artemisia dracunculus L., malurt Artemisia absinthium L., malurt Artemisia vulgaris L. er meget udbredt inden for folkemusik, traditionel medicin og fødevareindustri. Artemisia annua L., et årligt malurt, blev med succes introduceret i kultur i mange lande, og i 2001 blev anbefalet af WHO som den vigtigste kilde til artemisinin, den første linie behandling for malaria. I dag lever lande, der producerer artemisinin, ca. en fjerdedel af de globale sundhedsbehov (Tolstikova, 2010; Xiao Wang, 2011). 137 biologisk aktive forbindelser blev isoleret fra det en-årige, herunder 40 sesquiterpener, 10 triterpener, 7 coumariner, 46 flavonoider, som kan tjene som grundlag for lægemiddeludvikling (Bhakuni, 2001). I 80'erne af det 20. århundrede forsøgte en gruppe forskere (Schroeter, 1989) at dyrke den vildt voksende del af Sovjetunionens etårige flora i CISA (Moskva). I dag udføres større værker om introduktionen af ​​første års emne på Tomsk State University. I Buryatia n. Annual er en vildt voksende art.

Sammen med den årlige parasit i Buryatia er Siver malurt Artemisia sieversiana Willd. Udbredt, hvilket også er en lovende art. Græsset af Seabera indeholder flavonoider, æterisk olie, coumariner (Tkachev, 2002; Shatar, 1998; Hanina, 1999; Suleimenov, 2009). Sivers essentiel olie er af interesse som en kilde til chamazulen, en giftfri forbindelse med antiinflammatoriske, bakteriedræbende, regenerative virkninger (Berezovskaya, 1991; Khanina, 1992).

Indtil nu har en detaljeret kemisk undersøgelse af savsmed og malurt af den årlige flora Buryatia ikke været udført som lovende kilder til biologisk aktive stoffer. Derfor er deres undersøgelse en uopsættelig opgave.

Formål: Farmakognostisk undersøgelse af Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd. og malurt årlige Artemisia annua L. som værdifulde kilder til biologisk aktive stoffer.

For at nå dette mål er det nødvendigt at løse følgende opgaver:

1. At identificere de anatomiske og diagnostiske tegn på antennedelen af ​​Sivers og P. et år gammel for at etablere merchandising indikatorer

råvarer, vurdere reserver og muligheden for at høste p. et år og p. Siversa på Republikken Buryatiens område

2. At studere den kemiske sammensætning af de vigtigste grupper af biologisk aktive stoffer i disse planter og bestemme deres kvantitative indhold, etablere lokalisering af æteriske olier og artemisinin i individuelle plantedele, studer dynamikken i deres akkumulering i udviklingsfaserne og bestem de optimale opsamlingsbetingelser;

3. At udvikle en metode til kvantitativ bestemmelse af artemisinin i den en-åriges antennedel

4. Bestem kvalitetsindikatorerne og standarderne for indholdet af basisk biologisk aktive stoffer, for at udvikle reguleringsdokumentation for lægematerialerråvarer - græsset i Siver malurt og græset med etårigt malurt.

Videnskabelig nyhed. De vigtigste diagnostiske egenskaber ved græsset Sivers og P. årlige blev oprettet, og de numeriske indikatorer, der var nødvendige for standardisering af råmaterialer, blev udviklet.

En undersøgelse blev foretaget af den kemiske sammensætning af Sivers græs og af etårigt græs. Indholdet af æteriske olier, flavonoider, fedtsyrer, makro- og mikroelementer blev bestemt. Flavonoider - luteolin-7-glucosid, rutin, quercetin og chryoeriol blev påvist ved HPLC-MS-metoden i disse planter. De vigtigste fedtsyrer i de undersøgte typer af malurt er palmitinsyre, linolsyre, linolensyre, 10% octadekensyre findes også i markant malurt.

Betingelserne for udvinding af artemisinin (type ekstraktionsmiddel, ekstraktionsmetode, ekstraktionstid) fra den årlige urte blev bestemt, og det blev fastslået, at maksimal ekstraktion af artemisinin opnås ved ultralyd og subkritisk CO2-ekstraktion. Ved HPLC-MS er det blevet fastslået, at den største mængde af artemisinin i den en-årige er indeholdt i blomstringsfasen i blomsterne.

Studier dynamikken i akkumulering af æterisk olie, afhængigt af udviklingsfasen og en del af planten. Den største mængde chamazulene æterisk olie p. Siversa akkumuleres i faser af spirende og blomstrende i blomsterstand.

De etablerede kvalitetsindikatorer for BAS er inkluderet i reguleringsdokumenterne.

Praktisk betydning. Reserverne og det mulige årlige indkøbsvolumen for en afvikling af Sivers og en afvikling på et år på Republikken Buryatiens område (afvikling af Sivers - fra 0,1 til 73,7 tons om året og en afvikling på et år - fra 1,2 til 122,3 tons om året).

En teknik er blevet udviklet til kvantitativ bestemmelse af artemisinin i p. Grass ved en årlig HPLC-MS-metode. Betingelserne for prøveudarbejdelse af råmaterialer til analyse til kvantitativ bestemmelse af artemisinin er videnskabeligt begrundede.

Standardiseringen af ​​råmaterialer er blevet udført, FS-projekter er blevet udviklet - "Siver Wormwood Herbal" og "Wormwood One-Year Grass".

Graden af ​​gennemførelse. Metoder til udvælgelse af æteriske olier og mikroskopisk analyse af data på godkendte og gennemførte i Apotek Institut for den pædagogiske proces med VPO "Buryat State University» (№1 gennemførelsen af ​​loven af ​​6. september 2011). Projekter af FS på græs af Siver malurt og etårig malurt er forberedt til overvejelse.

Til forsvaret er taget ud:

• Resultaterne af undersøgelsen af ​​den anatomiske struktur, bestandene, ægthedsprincippet hos Sivers og P., der vokser i Buryatia;

• resultater af en kemisk undersøgelse af biologisk aktive stoffer og deres sæsonhistoriske dynamik;

• Resultater af undersøgelser om standardisering af den ovennævnte del af Sivers p. Og et års s.

Tilnærmelse af arbejdet. De vigtigste bestemmelser i afhandlingen blev præsenteret og diskuteret på: en videnskabelig-praktisk konference med international deltagelse "Udviklingen af ​​traditionel medicin i Rusland: erfaring, forskning, udsigter" (Ulan-Ude, 2010); 7. Winter Symposium på Chemometrics "Moderne Metoder til Data Analysis" (Saint-Petersburg, 2010); den internationale videnskabelige konference dedikeret til 15-årsdagen for Buryat State University "Faktiske studier af Baikal Asien" (Ulan-Ude, 2010); V international videnskabelig-praktisk konference "Prioriteter og træk ved udviklingen af ​​Baikal-regionen" (Ulan-Ude, 2011); X internationale videnskabelige-praktiske konference "Problemer med botanik i Sydsibirien og Mongoliet" (Barnaul, 2011); IV All-Russian Conference "Nye fremskridt inden for kemi og kemisk teknologi af plantematerialer" (Barnaul, 2009); XVI International Conference of Students, Postgraduates and Young Scientists "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV International Ecological Student Conference "Ruslands økologi og tilstødende områder" (Novosibirsk, 2010); II All-Russisk videnskabelig-praktisk konference for studerende, kandidatstuderende og unge forskere "Teknologier og udstyr i den kemiske, bioteknologiske og fødevareindustrien" (Biysk, 2009); All-russisk videnskabelig-praktisk konference "Vegetation

Baikal-regionen og tilstødende områder "(Ulan-Ude, 2011); V Skoleseminar for unge forskere i Rusland "Problemer med bæredygtig udvikling i regionen" (Ulan-Ude, 2009); den regionale ungdoms videnskabelige-praktiske konference med international deltagelse "Miljøvenlig og ressourcebesparende teknologier og materialer" (Ulan-Ude, 2010).

Arbejdet blev udført som en del af forskningsarbejdet: RFBR: 08-04-90202-Mong_a "Research biogenetiske love biosyntese af bioaktive forbindelser endemisk plante af Centralasien", 08-04-98037-r_sibir_a "den kemiske sammensætning af planter som indikator (2008-2009). tilstanden af ​​økosystemerne i Baikal-regionen "(2008-20 Yugg); tværfagligt integrationsprojekt nr. 93 "Udvikling af forskning inden for medicinsk kemi og farmakologi som et videnskabeligt grundlag for udvikling af indenlandske lægemidler"; et fælles projekt med videnskabsakademiet i Mongoliet "Indhentning af nye lipo- og nanosomale former for stoffer med naturlige råstoffer"; RFBR: 10-03-16001-mob_z_ros "Unge Forskere mobilitet" (2010), 11-03-90705-mob_st videnskabeligt arbejde (uddannelse) af unge russiske forskere i de førende videnskabelige institutioner i Den Russiske Føderation i 2011 (2011.).

Publikationer. Ifølge resultaterne blev der offentliggjort 17 videnskabelige artikler, hvoraf 3 blev offentliggjort i tidsskrifter, der blev anbefalet af Den Russiske Føderations Forsvarsministeriums Højere Attestationskommission.

Afhandlingens omfang og struktur. Afhandlingsarbejdet præsenteres på 172 sider skrevet tekst og består af introduktion, litteraturrevision (1 kapitel), eksperimentel del (4 kapitler), generelle konklusioner, referenceliste og applikationer. Arbejdet er illustreret med 37 tabeller og 61 figurer. Det bibliografiske indeks indeholder 139 kilder, herunder 42 udenlandske.

I introduktionen understreges emnet relevans, formålet med og målene for forskningen er formuleret, den videnskabelige nyhed og den praktiske betydning af arbejdet præsenteres.

Det første kapitel (gennemgang af litteraturen) præsenterer data om den kemiske sammensætning, spektret af farmakologisk aktivitet, anvendelsen af ​​Artemisia L.-slægten i traditionel og moderne medicinsk praksis.

Det andet kapitel (materialer og metoder) præsenterer data om studieobjekter, anvendte metoder, enheder og reagenser, andre metodologiske oplysninger.

Det tredje og fjerde kapitel indeholder data om undersøgelsen af ​​de anatomiske og diagnostiske tegn på Severs S og et etårigt. Efter metode

UV-spektrofotometri bestemmer det samlede indhold af flavonoider og tanniner i objekterne. Ved hjælp af GC-MS blev den kvalitative og kvantitative sammensætning af æterisk olie og fedtsyrer af malurt undersøgt. HPLC-MS-metoden fastslog det kvalitative og kvantitative indhold af flavonoider. Den elementære sammensætning af planter blev bestemt ved AAS-metoden. En teknik til kvantificering af artemisininindhold er blevet udviklet og foreslået. ved HPLC-MS. Derudover har vi undersøgt de kemiske sammensætninger af de æteriske olier af fem arter af Artemisia, den mest hyppige i Buryatia og Mongoliet - Gmelin malurt Artemisia gmelinii Web. et Stechm., malurt, gråt Artemisia glauca Pall, ex Wild., malurt, storkrummet Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess., Sievers malurt Artemisia sieversiana Willd. og Artemisia annua L.

Det femte kapitel indeholder data om standardiseringen af ​​den ældres Siver og P., der er foreslået som lovende kilder til henholdsvis chamazulene og artemisinin.

Hovedindholdet i arbejdet

Forskningsobjekter og -metoder. Undersøgelsens formål var prøver af græs fra Sivers og årlige landsbyer indsamlet i forskellige distrikter i Republikken Buryatia (Ivolginsky, Pribaikalsky, Selenginsky, Tunkinsky, Zakamensky, Kurumkansky) i Irkutsk-regionen (Olkhon island) og Mongoliet (Selenginsky Aimak) i perioden fra 2008 indtil 2011

Mikroskopisk analyse blev udført i overensstemmelse med artiklen "Teknik for mikroskopisk analyse" (GF XI, udgave 2) på Mikmed-mikroskoper (Lomo, Rusland) med et okular på 10x; linser 4x, 10x, 40x og MS-300 (TFXS), Fluorescerende System Set (Mikro, Østrig) med et okular 10x; linser 4x, 10x, 40x. Udbyttet af råmaterialer blev bestemt ved metoden for regnskabssider.

Ekstraktion af den essentielle olie blev udført ved hydrodistillation; ekstrakter blev opnået ved ultralydsekstraktion, CO2-ekstraktion og maceration.

Undersøgelsen af ​​disse objekters kvalitative og kvantitative sammensætning blev udført ved hjælp af følgende metoder - GC-MS, HPLC-MS, TLC, BC, UV-spektrofotometri og AAS. Kromato-massespektrometrisk analyse blev udført på en Agilent 6890 gaskromatograf med et HP MSD 5973N quadrupol massespektrometer (Agilent Technologies, USA; kolonner: HP-5ms, g = 0,25 mm, filmtykkelse 0,25 μm (copolymer - 5% diphenyl - 95% dimethylsiloxan) og DBWax med en indre diameter på 0,25 μm, bæregas - helium, g) strømning 1-1,5 ml / min; HPLC-MS-analyse blev udført på højtydende væskechromatografer Finnigan Surveyor (Thermo Scientific, USA) og Agilent 1200 (Agilent Technologies,

USA) med masselektrisk detektor "LCQ Advantage MAX" ("ionfælde") af mærket "Finnigan" (Thermo Scientific, USA) og med en tandem massespektrometrisk detektor ("ion trap") 6330 (Agilent Technologies, USA), metode ioniseringselektrospray; betingelser: Hypersyl Gold Cl8, 5 mikrometer, 150x4 mm kolonner (Thermo Electronic Corporation, USA) og Zorbax Eclipse C18, 5 mikrometer, 4,6 * 150 mm (Agilent Technologies, USA), eluentstrømningshastighed 0,5 ml / min. TLC-analyse blev udført på Sorbfil PTSH-P-A-UV-plader (Imid Ltd, Rusland); BC-analyse blev udført på FN 6-papir (Filtrak, Tyskland); Absorptionsspektre blev registreret på et StellarNet Green Waiv spektrometer (StellarNet Inc, USA). AAC analyse blev udført på et SOLAAR MB spektrofotometer (Thermo Scientific, USA) og Varían model AA240 (Varian, Rusland).

Statistisk behandling af eksperimentelle data blev udført ved metoden for variation-statistisk analyse. En del af dataene blev behandlet af CIM (softwarepakke Sirius version 6.0, Pattern Recognition Systems, a / s, Norge).

Farmakognostiske egenskaber ved P. Sivers og P. af urtens urt. Følgende indikatorer for kvaliteten af ​​lægemidler råvarer. Gras sibers malurt. Hele råmaterialer. Faste eller delvis bløde toppe af blomstrende stængler højst 45 cm lange, uden grove dele af stammen. Stem pubescent, lige, ribbet og forgrenet. Radikale og mellemliggende blade er blomstrende, trekantede, tre gange pinnate, aflange flade skiver, 1,4 - 2,5 cm lange, 0,1 - 0,5 cm brede. Kurver halvkugleformede, 0,4 - 0,6 cm i diameter, bred panikulere blomsterstanden. Edge pistillate blomster (der er ca. 18). Blomster biseksuelle, talrige, med en tragtformet corolla.

Græsnorm årligt. Hele råmaterialer. Massive eller delvis løvede toppe af blomstrende stængler højst 50 cm lange, uden grove dele af stammen. Stammen er bar, lige, furrowed, grøn i begyndelsen af ​​vækstsæsonen, mørk lilla i slutningen. Bladet af de nederste og midterste stamme blade er ovoid eller oval, 1,5-7,0 cm lang på petiole, elliptiske i længden, uden vinger, tre gange overudtrykt i brede segmenter, segmenter og segmenter, 0,5 til 0,8 cm lange, ikke brede mere end 0,2 cm. Kurve med en diameter på ca. 0,2 cm i paniculate blomsterstand.

Ved en anatomisk undersøgelse af græsset P. Sivers og P. et år blev der identificeret en række anatomiske og diagnostiske træk. Strukturen af ​​blade af malurt er præsenteret i tabel 1. Stammen af ​​Sivers malurt er grov, de aflange epidermis celler.

Der er essentielle oliekirtler, T-formede hår og afrundede stomatale celler. Stammen har en bundttype struktur. I ribben er områder af den slanke. Collanteral bjælker arrangeret i en cirkel er karakteriseret ved stærkt udviklet sclerenchyma. Velmærkede endoderm, der består af store tyndvæggede celler af en rund form, tæt tilstødende hinanden.

Karakteristik af bladets anatomiske struktur Sivers og p. Etår __

Siver malurt epidermis malurt årligt

øverste lige væg

nedre snoede væg, lavamplet

type Ustigichesky apparatur øvre anomocytisk

lavere anomocytisk stomata mere end på øvre side af bladet

stomata oval form med lentil stomatal celler

Karakteristik af hår tæt på pubberende med T-formede hår bestående af to-, firecelleben og multicellulære flagellaterede hår, der er to typer hår - stellat og T-formet med et multicellulært ben

terpenoidholdige strukturer er multicellulære, store essentielle oliekirtler. schizogene beholdere og ikke-specialiserede parenchymale celler

på tidspunktet for et år gammelt, rillet, næsten blott stamme, aflange epidermis celler. I det etåriges stængel og i s. Sivers stilk, en puchkovy struktur, er der essentielle oliekirtler, sjældne hår og ovale stomatale celler; I begge typer malurt er epidermale celler på corolla af rørformede blomster tyndvæggede, aflange med spidsede ender, der er kendetegnet ved tilstedeværelsen af ​​et stort antal æteriske oliekirtler og fraværet af hår.

Merchandising indikatorer er blevet oprettet på flere batcher af råvarer:

Gras sibers malurt. Aske uopløselig i 10% saltsyre (ikke over 2%), ekstraktionsstoffer (ikke mindre end 33%), brune og svarte (højst 5%) ), organisk urenhed (højst 2%), mineralsk urenhed (højst 0,5%).

Græsnorm årligt. Fugtighed ikke over 7%, total aske (ikke over 9%), uopløselig aske i 10% saltsyre (ikke over 1%), ekstraktionsstoffer (mindst 42%), brune og svarte (højst 5%) organisk urenhed (højst 2%), mineralsk urenhed (højst 0,5%).

Ifølge resultaterne af en foreløbig fytokemisk analyse blev essentielle olier, flavonoider, tanniner, hydroxycinnaminsyrer, coumariner, fedtsyrer og sesquiterpenlactoner fundet i græsset Sivers og P.

Lagre af Sivers og P. på et år. Tabel 2 indeholder data om udbytter, biologiske (BZ) og driftsreserver (EZ) af Sivers, og årligt, der vokser i forskellige områder af Buryatia.

Lagre af råvarer af S. Sivers og p. Et års år i områder i Buryatia

høstareal (g / m2) total E overvækst, (ha) BS (kg) EZ (kg)

env. Gusinoozersk by 58,0 ± 4,1 0,8 530,0 398,4

env. a. Ganzurino 33,8 ± 2,4 0,4 ​​154,4 116,0

env. a. Borater 220,6 ± 15,1 20,0 50160,0 41100,0

env. med Taphar 500,0 ± 26,3 0,5 2763,0 2237,0

env. a. Sotnikovo 240,2 ± 19,4 25,0 69750,0 52850,0

env. Ulan-Ude 500,0 ± 32,5 0,5 2815,0 2175,0

Kabansky-distriktet 285.SH = 19,7 30,0 97320,0 73680,0

Tunkinsky District 70,0 ± 8,0 0,2 172,0 108,0

Pribaikalsky District 280,9 ± 25,3 1,0 3315,0 2297,0

Kurumkansky distrikt 370,6 ± 34,0 0,1 438,6 302,6

env. a. Hurumsha 228,0 ± 10,8 0,6 1497,6 1238,4

env. Befolkning 500,0 ± 46,2 30,0 177720,0 122280,0

env. a. Sotnikovo 39,0 ± 2,1 25,00 10800,0 8700,0

Kabansky District 400,0 ± 27,1 30,0 136260,0 103740,0

Produktiviteten af ​​den ovennævnte del af Siver malurt og den årlige p. I de undersøgte tykkelser varierer fra 33,8 ± 2,4 til 500,0 ± 32,5 g / m2 og henholdsvis 39 ± 2,1 til 500 ± 46,2 g / m2. De biologiske og operationelle reserver af ovennævnte dele af de undersøgte planter er 154,4-97320,0 kg og 116,0-73680,0 kg (Sivers malurt), 1,497,6177720,0 kg og 1238,4-122280,0 kg (årligt malurt).

Kemisk undersøgelse af ært P. Sivers og P. af de årlige Flavonoider. Det samlede kvantitative indhold af flavonoider blev bestemt ved den generelt accepterede metode til spektrofotometrisk bestemmelse i græs af Sivers og P. annuals, hvad angår luteolin-7-glucosid i forskellige faser af planteudvikling (vegetation, spirende, blomstrende, frugtplantage). Det højeste indhold af flavonoider blev opstillet i prøver af Severs og en-årige prøver indsamlet i den spirende fase - 0,68 og 0,66%, den laveste - i råvarer samlet i frugtfasen - 0,31% og 0,38% (tabel 3).

Det kvantitative indhold af mængden af ​​flavonoider i form af luteolin-7-glucosid i P. Sivers græs og i græs på P. et år afhængigt af vegetationsfasen

planteudviklingsfase, mængden af ​​flavonoider, hvad angår luteolin-7-glucosid (%)

Malurt Sivers malurt årligt

vegetation 0,67 ± 0,02 0,64 ± 0,04

spirende 0,68 ± 0,05 0,66 ± 0,03

blomstrende 0,48 ± 0,03 0,52 ± 0,02

fruiting 0,31 ± 0,01 0,35 ± 0,01

Følgende flavonoider blev påvist ved HPLC-MS-metoden: rutin, luteolin-7-glucosid, chryo-eriol, quercetin i Sivers græs og i etårigt græs (figur 1).

Fig.1. Kromatogram af flavonoider og P. Sivers, P. et år.

Den eksterne standardmetode blev brugt til at bestemme det kvantitative indhold af rutin, chryseriol, quercetin i Sivers græs og i det enåriges græs (tabel 4).

I begge typer malurt er luteolin-7-glucosid 0,04-0,08% (Sivers) og 0,88-1,77% (n. Et år) indeholdt i den største mængde quercetin 0,001% (Sivers) og 0,0070,009% (n. årligt).

Det kvantitative indhold af flavonoider (HPLC-MS)

Siver Wormwood Flavonoide samling (%)

rutin quercetin luteolin-7-glucosid

Ivolginsky distrikt, okr. a. Taphar, 0,002 ± 0,0001 0,001 ± 0,0002 0,040 ± 0,003

Ivolginsky distrikt, okr. p. Sotnikovo 0,002 ± 0,0002 0,001 ± 0,0001 0,080 ± 0,005

FLY er et år gammel og Ivolginsky-distriktet, okr. p. Sotnikovo 0,018 ± 0,001 0,007 ± 0,0003 0,880 ± 0,004

Kabansky distrikt, okr. a. Kakerlak 0,012 ± 0,002 0,009 ± 0,0003 1,700 ± 0,005

Fedtsyrer. Malurtprøver indeholder fra 8 til 13 fedtsyrer. Fælles for begge arter er palmitinsyre (16: 0), linolsyre (18: 2p6), linolensyre (18: ZpZ) syrer i mængden 56,87-82,67% (af de samlede fedtsyrer) i Severs, 58,36-67,19% n. et år (af de samlede fedtsyrer). Ud over disse syrer indeholder en signifikant mængde 10-octadecensyre (18: 1p8) fra 3,64% til 11,65%. Også i alle prøver blev 10-methyl-undecanoic (¡° 12: 0) og 12-methyl-tetradecanoic (og 15: 0) syrer påvist, deres indhold overstiger ikke 1%. Kromatogrammer er vist i figur 2.

Fig. 2. Chromatogrammer af fedtsyrer (a) p. Sivers og (b) p. Ét år (I: (16: 0), 2 - (18: 2ep6), 3 - (18: ЗПЗ), 4 - (18: 1ep8) ).

Elementær sammensætning. I græsset på s. Sivers, der vokser i forskellige områder af Buryatia, er calciumindholdet 0,56 ± 0,02-0,89 ± 0,03%, magnesium - 0,12 ± 0,01-0,28 ± 0,01%. Det højeste indhold af calcium og magnesium er noteret i prøver opsamlet i Kurumkansky-distriktet, det laveste indhold af magnesium i råmaterialerne fra Tunkinsky-distriktet og calcium i planter samlet i Selenginsky-distriktet. Jern findes hovedsagelig i planter fra Kurumkansky-regionen

(141,25 ± 12,13 mg / kg), mindre - fra Selenginsky-distriktet (141,25 ± 12,13 mg / kg).

Indholdet af zink varierer fra 23,73 ± 1,56 til 59,8 ± 1,56 mg / kg - п. Sivers og fra 55,32 ± 0,83 til 66,50 + 0,89 mg / kg er en-årig, hvilket er acceptabelt for den normale funktion af biokemiske processer. Kobberindholdet er 8,42 ± 0,45-24,30 ± 1,56 mg / kg -n. Sivers, 9,37 + 0,18-13,48 + 0,44 mg / kg - et år gammelt (den krævede mængde er fra 5 til 30 mg / kg). Nikkel i græs Seabera indeholder 0,40 ± 0,01 -2,06 ± 0,03 mg / kg, hvilket svarer til en plantebehov på 0,1 til 5 mg / kg. Koboltindholdet i anlægget bør ikke overstige 1 mg / kg, bly - 10 mg / kg, cadmium - 0,2 mg / kg, krom - 1,0 mg / kg (Kabata-Pendias, 1989; Kashin, 2009). I Sivers p. Cobaltindhold er mindre end 0,3 mg / kg, bly er 3,19 ± 0,11 mg / kg, på s. En årig - 0,59 ± 0,02 mg / kg, cadmium - 0,18 ± 0,02 mg / kg, krom - 0,76 ± 0,02 mg / kg i alle prøver. Således er indholdet af makro- og mikronæringsstoffer i koncentrationer, der er normale og tilstrækkelige til strømmen af ​​vitale funktioner til planter.

Siver malurt urt æterisk olie. Essentiel olie fra planter blev isoleret ved farmakopé metode nr. 2. I forskellige prøver på s. Sivers essentielle olieindhold varierer fra 0,1 til 1,9%. I de essentielle olier af Sivers, der vokser i forskellige dele af Buryatia, er der blevet identificeret mere end 80 forbindelser.

Vi har undersøgt sammensætningen af ​​æteriske olier isoleret fra græsset i Sivers malurt, der vokser i forskellige dele af Buryatia

(Ivolginsky (1), Selenginsky (2), Kurumkansky (3), Pribaikalsky (4,9),

Tunkinsky (5), Zakamensky-distrikterne (8)), Irkutsk-regionen (Olkhon island) (6) og Mongoliet (7). Det højeste udbytte af æterisk olie er i Siver malurt, der vokser i Tunkinsky og Kurumkansky regioner (0,4%). Den mindste mængde olie blev isoleret fra planter indsamlet på Zakamensky, Pribaikalsky-regionen og Mongoliet (0,1%) (figur 3).

Dynamikken for ophobning af æterisk olie blev undersøgt afhængigt af fasen af ​​planteudvikling (figur 4). Resultaterne viste, at olien i største mængde akkumulerer i blomstringsfasen (0,6%), i

Fig. 3. Udbyttet af æterisk olie p. Sivers fra vækststedet.

faser af spirende og fruiting akkumulerer den samme mængde æterisk olie (ca. 0,3%).

L, 1,8-daneol-I-terpineal-4,3-p-farmakom 1 ■ sishna-4,11-dnen

Fig. 5. Kromatogram af æterisk olie p. Sivers.

Fig. 4. Udbyttet af æterisk olie p.

Sivers på forskellige faser af planteudvikling (i vækstsæson, b - spirende, c - blomstrende,

Alle bestanddele af æterisk olie kan opdeles i to grupper - konstant, det vil sige fundet i olien i alle faser af planteudvikling og sporadisk forekommende (mindre). I alle prøver af den essentielle olie af Sivers, uanset planteavlsområdet, 1,8-cineole (2,34-22,57%), terpineol-4 (0,964,70%), germacrene E (8,66-12,36%), P-farnezen (0,64-5,17%), Selina-4,11-dien (0,97-4,66%), Neril-2-methylbutanoat (4,80-8,79%) og Chamazulene (0,60-25,36%) (Fig. 5).

Æteriske olier, isoleret fra planter, der vokser i steppeområderne, i Pribaikalsky-distriktet (25,36%), indeholder den mindste mængde hamazulene og den mindste - i Zakamensky-distriktet (0,60%).

I sammensætningen af ​​æterisk olie isoleret fra planter i forskellige faser af udvikling - vegetation, spirende, blomstrende og frugter, blev 54 forbindelser identificeret. De konstante komponenter er 1,8-cyneol, linalool, terpineol-4, a-terpineol, p-farnezen, selina-4,11-dien, chamazulen.

Indholdet af chamazulen varierer fra 0,20 til 24,69% i vegetationsfasen fra 21,34 til 61,91% i den spirende fase fra 1,53 til 34,42% i blomstringsfasen fra 10,87 til 20,64% i frugtfasen. Sættet af sporadisk forekommende komponenter er signifikant (op til 40 forbindelser) på samme tid deres lave kvantitative indhold, derfor er det svært at identificere afhængigheden af ​​deres sammensætning på fasen af ​​planteudvikling.

For at vurdere indflydelsen af ​​udviklingsfasen på oliens bestanddele blev anvendt CIM (figur 6).

Fig. 6. GK-model afhængig af sammensætningen

essentiel olie fra udviklingsfasen af ​​Sivers (I-vegetation, 2-budding, 3-blomstrende, 4-fruiting)

dette er en af ​​analyserne

multidimensionale data, der tillader at allokere skjulte variabler i store datarammer og analysere relationer,

eksisterende i det studerede system. Målet med hovedkomponentmetoden er at erstatte den oprindelige beskrivelse af prøverne ved hjælp af p-variabler for en ny form, repræsenteret inden for de vigtigste komponenter (Esbenson, 2010).

På GK-modellen er det muligt at skelne adskilte områder afgrænset fra hinanden og svarende til forskellige udviklingsfaser af Sivers malurt, hvilket indikerer at sammensætningen af ​​smør i forskellige udviklingsfaser adskiller sig i indholdet af mindre forbindelser.

I forskellige faser af Sivers-udvikling falder således den essentielle olies kvalitative sammensætning konstant og adskiller sig i mindre forbindelser.

En undersøgelse af faser af planteudvikling viste, at den største mængde chamazulen i den essentielle olie i Seversa er koncentreret i de spirende og blomstrende faser, mens ophobningen af ​​olie i blomstringsfasen er større end i den spirende fase. Derfor studerede vi i disse faser egenskaberne ved ophobning af æteriske olier i forskellige dele af planten (figur 7).

Om fase af spirende I blomstringsfasen

Fig. 7. Udbyttet af æterisk olie i forskellige dele af Sivers.

ekstraherbar æterisk olie fra forskellige plantedele i blomstringsfasen viste, at blomstrer (kurve) er kendetegnet ved det højeste udbytte, bladene er mindre og stængler er minimal. I fase

spirende i græsset P. Sivers er mest af alt indeholdt olie i knopperne, lidt mindre i bladene og den mindste mængde olie i stilkene.

En analyse af den æteriske olie fra forskellige dele af anlægget viste, at komponentsammensætningen af ​​olien udvundet af blomstrerne og græsknoppene hos Sivers er mest forskelligartede, er mere end 70 komponenter, så er mere end 40 komponenter fra bladene og mindre end alle forbindelserne i olien ekstraheret fra stilkene omkring 20 komponenter. De essentielle bestanddele af de essentielle olieprøver er uanset deres placering 1,8-cyneol, linalool, terpineol-4, germacren 13, a-terpineol, a-bisabolol og chamazulen (tabel 5).

Konstante komponenter af Siver Wormwood Essential Oil

komponenter indhold af komponenter i% af hel olie

blomstrende fase spirende fase

blomstrer forlader stængler knopper forlader stilke

1,8-cineol 8,00 6,39 6,04 1,94 + 23,41

linalool 5,93 1,38 0,65 + + 3,83

terpineol-4 2,56 2,10 0,57 0,88 + 5,37

a-terpineol 2,39 2,10 0,82 1,44 + 4,66

Germakren E 7,20 7,81 1,96 11,18 7,81 10,57

a-bisabolol 2,28 1,25 1,66 5,24 10,93 5,86

Chamazulene 6,23 23,02 37,11 7,81 21,17 3,51

Analysen viste, at den kvalitative sammensætning af den essentielle olie i forskellige vækstområder i forskellige udviklingsfaser og i forskellige dele af Seversa falder konstant og adskiller sig i sporadisk fremkomne forbindelser.

Æterisk olie af malurt årlige urt. Som i det første tilfælde blev udvælgelsen af ​​den essentielle olie udført ved farmakopé metode nr. 2. Den kemiske sammensætning af p. Årlige æteriske olier er repræsenteret af 40 komponenter. De konstante komponenter er artemisia-keton (10,24-14,62%), caryophylen (9,93-10,71%), germacrene B (3,53-7,82%), p-selenen (21,75-29,46%), karyofillenoxid (4,44-14,31%) 8).

På forskellige stadier af planteudvækst ekstraheres 0,5 til 0,7% æterisk olie fra malurtens urt. Det højeste udbytte af æterisk olie i blomstringsfasen (0,7%) (figur 9).

På alle stadier af planteudvikling er artemisiaketon, karyofillen (3-selen, karyophylneoxid) indeholdt i æterisk olie. Det kvantitative indhold af hovedkomponenterne i forskellige faser af planteudviklingen ændres. Indholdet af artemisieketon er størst i frugtfasen, P-selenen - i vegetationsfasen, og karyofillenoxid - i blomstringsfasen.

3. Kromatogram af æterisk olie s. Et år.

Fig. 9. Udbyttet af æterisk olie p. Årlig i forskellige faser af planteudvikling (in-vegetation, b-bud, c-blomstring, p-fruiting).

De essentielle oliekirtler er ujævnt fordelt i planten, og derfor kan forskellige æteriske olier fra forskellige dele af planten skelnes og varierer både kvantitativt og kvalitativt.

Særlige egenskaber ved ophobning af æteriske olier i blomstringsfasen i forskellige dele af det årlige malurt (fig. 10) er blevet bestemt.

Mere end 60 forbindelser blev fundet i æteriske olier fra forskellige dele af planten. konstant

Komponenter til olier fra blomstrer, blade, stilke er artemisia alkohol, p-karyophillen, oxid

Hovedkomponenten i den årlige essentielle olie er artemisiaketon - den findes ikke i olien fra stilken, selvom den er halv i olien fra blomsterstande (49,14%) og næsten en tredjedel af bladene (29,76%).

Analysen af ​​æteriske olier viste, at i forskellige vækstområder, i forskellige udviklingsfaser og i forskellige dele af n. Årlig græs såvel som n. Sievers græs, er den essentielle olies kvalitative sammensætning den samme i konstant og anderledes i sporadisk fremkomne komponenter.

Udvikling af en metode til kvantitativ bestemmelse af artemisinin i malurt ved en årlig metode HPLC-MS

Udvælgelse af betingelser for den kvantitative udvinding af artemisinin fra det årlige malurt. At udvikle en kvantitativ metode

1 2 i fig. 10. Udbyttet af æterisk olie i forskellige dele af den årlige (1-blomsterstand, 2-blade, 3-stængler).

Artemisininbestemmelser i græsset af P. af etårige ekstraktionsbetingelser blev valgt under hvilke udvinding af artemisinin når sin maksimale værdi. Ekstrakterne opnået ved fremgangsmåderne til maceration, ultralydsekstraktion og subkritisk CO2-ekstraktion blev analyseret. Forskellige opløsningsmidler blev anvendt som ekstraktionsmidler (tabel 6). Indholdet af artemisinin i ekstrakter adskilt ved ultralydsekstraktion og maceration ved anvendelse af forskellige opløsningsmidler er ikke signifikant anderledes (0,038-0,040%). Den største mængde artemisinin (0,054%) er indeholdt i ekstraktet opnået under subkritisk CO2-ekstraktion.

Metoder og parametre til ekstraktion af ekstrakter fra græs af malurt en-årig ved forskellige ekstraktionsmetoder ______

ekstraktionsmetode-ekstraktionsudvindings-tid / ekstraktionsparametre artemisininindhold i% i form af a.s.s.

ethanol 24 h. forhold mellem råmaterialer: opløsningsmiddel (1: 5), T = 25 ° С 0,040 ± 0,002

Maceration ethanol 48 h / forholdet mellem råmaterialer: opløsningsmiddel (1: 5), T = 25 ° С 0,038 ± 0,002

Hexane 24 h / Prøve: opløsningsmiddelforhold (1: 5), T = 25 ° С 0,039 ± 0,002

ethylacetat 15 min / forholdet mellem råmaterialer: opløsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 kHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001

ethanol 5 min. / forholdet mellem råmaterialer: opløsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 KHz, T = 25 ° С 0,022 ± 0,001

Ultralydsekstraktion af ethanol 10 min. / Forholdet mellem råmaterialer: opløsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 KHz, T = 25 ° С 0,024 ± 0,001

ethanol 15 min / forholdet mellem råmaterialer: opløsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 KHz, T = 25 C, C 0,039 ± 0,002

ethanol 20 min / forholdet mellem råmaterialer: opløsningsmiddel (1: 5), lydfrekvens 50 kHz, T = 25 ° С 0,039 ± 0,002

CO2-ekstraktion af CO2 24 h.1 strømningshastighed 30 l / time, T = 20-22 ° C, P = 6,0-6,2 MPa 0,054 ± 0,003

Af alle de foreslåede metoder til ekstraktion er ultralydsekstraktion optimal (ethanol-ekstrakt), da denne metode er hurtig (ekstraktionstid 15 minutter) og tilgængelig ved instrumentering.

Metode til kvantitativ bestemmelse af artemisinin.

Udviklingen af ​​en teknik til kvantitativ bestemmelse af artemisinin i årets urt blev udført af HPLC-MS. Vi brugte Agilent 1200 HPLC med en MC-detektor ("ion trap") 6330, en ioniseringsmetode - elektrospray. Eluering blev udført i isokratisk tilstand (50% (A): 50% (B)), sammensætningen af ​​udgangsbuffer (A) vandig opløsning af myresyre (pH = 3) + 2 ml af en mættet opløsning af ammoniumacetat, elueringsbuffer (B) acetonitril. Den volumetriske strømningshastighed for elueringsmiddel er 0,5 ml / min, volumenet af den injicerede prøve er -25 μl. Ioner blev registreret i overvågningstilstanden af ​​positivt ladede ioner (SRM) med en masse på 300 (på grund af tilsætningen af ​​NrH4-ion til artemisininmolekylet), vinduebredde (299301) m / z. Resultaterne blev bekræftet ved tandem-massespektrometri; en datterion (MS2) med en masse på 223 m / z blev opnået fra parentionen (MS) med en masse på 300 m / z.

Tilfældigheden af ​​retentionstider og massespektre af artemisinin, bestemt i græs af en-årig med anvendelse af CO-opløsningen af ​​den angivne forbindelse, tillader os at konkludere, at den rene forbindelse er identisk med ren artemisinin (fig.11, 12).

Fig. 11. Kromatogram af CO artemisinin og P. årligt ekstrakt.

iv ix язтжяауат ассс »

Figur 12. Massespektre af a) artemisinin indeholdt i n. Årligt græs, b) af artemisinin CO.

Til kromatografi-massespektrometri blev en absolut kalibreringsmetode anvendt til kvantitativ analyse. For at bestemme kalibreringskurvens koefficient blev der fremstillet flere (mindst 20) kalibreringsopløsninger af artemisisinin. Fremstilling af opløsninger blev udført som følger: 5 * 10 "3 g artemisinin blev vejet, anbragt i en 50 ml volumenkolbe, 25 ml acetonitril blev tilsat. Indholdet i kolben

grundigt blandet indtil fuldstændig opløsning, hvorefter volumen i kolben blev bragt til mærke med destilleret vand. Gennemført analyse ved forskellig mængde af den injicerede prøve fra 1 til 40 μl. Spidsområdet i kromatogrammerne blev målt. Ifølge de opnåede data blev en kalibreringskurve konstrueret (figur 13). Spidsarealværdierne blev plottet på ordinataksen, og de tilsvarende værdier af artemisininindhold (g) blev plottet på abscissaaksen.

Fra de opnåede data blev kalibreringskoefficientens koefficient beregnet: к = Б / х, hvor ¼ er kalibreringskurvens koefficient, 5 er toppen af ​​den analyserede opløsning, x er indholdet af artemisinin (g)

Kalibreringskurvens koefficient (k) defineres som det aritmetiske gennemsnit af koefficienterne k,.

Fig. 13. Gradueringskort til bestemmelse af artemisininindhold.

Artemisininindholdet i det etårige malurt-ekstrakt blev bestemt ved formlen: C = 5 / c, hvor 5 er toppunktet af artemisinin i den analyserede opløsning, og k er koefficienten for kalibreringskurven. Metrologiske data om bestemmelsen af ​​kalibreringskurvens koefficient (k) er angivet i tabel 7.

Metrologiske egenskaber ved beregningen af ​​koefficienten for kalibreringskurven artemisinin

1 X Э2 Э Р ЮУ) Дх Е,%

19 1,32 * 10m 1,84 * О15 4,25 * 10 "95 2,09 1,28 * 10" 1,97 1,90 * 10 "

Resultaterne af den kvantitative bestemmelse af artemisinin i det ormede årlige ekstrakt fremgår af tabel 8.

Resultaterne af den kvantitative bestemmelse af artemisinin i ekstraktet af malurt-et-års metode HPLC-MS

Metrologiske egenskaber (n = 5, P = 95%)

0,039 0,75 * 10 "0,27 * 10" 2 2,57 0,83 * 10 ° 1,21 0,12 * 10 "'

Den udviklede metode bestemmer det kvantitative indhold af artemisinin i græs n. Én årig i blomstringsfasen (tabel 9). Teknikken er valideret - specificitet, præcision bekræftet.

Indholdet af artemisinin i græs malurt årligt

Artemisinin område og dato for indsamling (%)

Ivolginsky-distriktet, 10 km fra Sotnikovo, 08/12/2010 0,054 ± 0,003

Ivolginhiy rn, 10 km fra Sotnikovo, 08/22/2011 0,027 ^.001

Ivolginsky distrikt, okr. a. Oriole, 08/19/2011 0,069 ± 0,004

Kabansky distrikt, okr. a. Tarakanovka, 08.22.2011 0.023 ± 0.001

I prøver indsamlet i Ivolginsky-regionen, i nærheden af Oriole indeholder den højeste mængde af artemisinin (0,069%), den mindste - i prøver fra Kabansky District, okr. a. Kakerlak (0,023%). Det blev fastslået, at den største mængde af artemisininplanter koncentrerer sig i blomstringsfasen - 0,039%, den mindste - i vegetation og spirende faser - fra 0,006 til 0,007%. Artemisinin blomstrer indeholder - 0,029%, lidt mindre - 0,021% i bladene, og minimumsmængden i stilkene er 0,007% (tabel 10).

Indholdet af artemisinin i græs af malurt årligt, afhængigt af vegetationsfasen, i forskellige dele af planten

udviklingsfase af anlægget

vegetation spirende blomstrende blade blomstring stængler

0,006 ± 0,0002 0,007 ± 0,0002 0,039 ± 0,003 0,021 ± 0,001 0,029 ± 0,002 0,007 ± 0,0002

Således er den optimale tid til at samle græs i det årlige malurt den blomstrende fase, og det er tilrådeligt at samle hele antennedelen.

Alle de opnåede resultater er inkluderet i FS-projekterne på græsset af Sivers malurt og urt af det årlige malurt.

1. De vigtigste diagnostiske egenskaber ved græsset i Sivers og P. et års græs blev afsløret, de numeriske indikatorer, der var nødvendige for standardisering af råmaterialer, blev udviklet. Resterne af Sivers og P., som vokser i forskellige områder af Republikken Buryatia, identificeres.

2. Indholdet af flavonoider, fedtsyrer, makro- og mikronæringsstoffer i græsset Sivers n og i græset af n. Et år blev etableret. Flavonoider - luteolin-7-glucosid, rutin, quercetin og chryoeriol blev påvist ved HPLC-MS-metoden i disse planter. De vigtigste fedtsyrer i de undersøgte typer af malurt er palmitinsyre, linolsyre, linolensyre, 10% octadekensyre findes også i markant malurt.

3. Det er blevet fastslået, at den essentielle olies kvalitetskomposition forbliver konstant uanset vækststedet og udviklingsfasen. De konstante komponenter af Sivers er 1,8-cyneol, terpineol-4, D-germacren, p-farnesen, Selina-4,11-dien, neyl-2-methylbutanoat og chamazulen og Artemisia-keton, karyofillen, germacrene et år gammelt D, p-selen, caryofiloxid. Akkumuleringen af ​​æterisk olie i blomstringsfasen er større (0,7%) end i den spirende fase (0,3%). Den største mængde chamazulene p. Sivers akkumuleres i faser af spirende (op til 62%) og blomstrende (op til 34%).

4. Betingelserne for udvinding af artemisinin (type ekstraktionsmiddel, ekstraktionsmetode, ekstraktionstid) fra den årlige urte blev bestemt, og det blev fastslået, at maksimal ekstraktion af artemisinin opnås ved ultralyd og precrisk CO2-ekstraktion. En metode til kvantitativ bestemmelse af artemisinin blev udviklet og valideret i en etårig HPLC-MS metode (relativ fejlfastsættelse på ± 1,21%). Det er blevet konstateret, at størstedelen af ​​artemisinin i græsset af en årlig urt ophobes i blomstringsfasen i blomstrer (0,039%).

5. Udviklede reguleringsdokumenter for råmaterialer - projektet for FS "Grass of Sivers malurt" og projektet for FS af "Græs af malurt et år".

Liste over papirer udgivet om emnet af afhandlingen

1. Zhigzhitzhapova, C.B. Den kemiske sammensætning af æterisk olie Artemisia gmelinii Web. et Stechm, der er hjemmehørende i Centralasien / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva og Plant Chemistry.-2010.-№2.-С. 131-133.

2. Zhigzhitzhapova, C.B. Kemisk sammensætning af Siver malurt æterisk olie Artemisia sieversiana Willd., Vokset i Buryatia / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Bulletin of the Buryat State University. Ser. Kemi-Physics. - 2009. - med. 3. - s. 69-71.

3. Zhigzhitzhapova, C.B. Sammensætning af Siver malurt æterisk olie Artemisia sieversiana Willd., Vokset i Buryatia og Irkutsk regionen / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Bulletin of the East-Siberian Scientific Center of the Sibirian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences. - 2009. - №2 (66). -C. 103-105.

4. Zhigzhitzhapova, S.V. Sammensætningen af ​​æterisk olie Artemisia sieversiana Willd. ved forskellige faser af planteudvikling / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // Bulletin of the East-Siberian Scientific Center of the Sibirian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences. - 2011. - №1 (77). Del 2. - s. 138-141.

5. Soktoeva, TE Komponent sammensætningen af ​​æterisk olie Artemisia glauca Pall, ex Willd. flora af Mongoliet / T.E. Soktoeva, S.V. Zhigzhitzhapova, LD

Radnaeva, B.B. Taraskin // Bulletin of young scientists. - Tomsk, 2011. -Vyp. 2. - s. 27-30.

6. Soktoeva, TE Den kemiske sammensætning af æterisk olie Artemisia gmelinii Web. Et Stechm. / T.E. Soktoev // Lomonosov-2009: Materialer fra XVI Intern. Conf. studerende, kandidatstuderende og unge forskere. - Moskva, 2009. - s. 37.

7. Zhigzhitzhapova, C.B. Essentiel olie af malurt Gmelin flora Buryatia og Mongoliet / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Nye præstationer inden for kemi og kemisk teknologi af planteråvarer": Materialer fra IV All-Russia. videnskabelig. Conf. - Barnaul, 2009. - s. 49-50.

8. Soktoeva, T.E. Sammensætningen af ​​den essentielle olie af Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd., Som vokser i Republikken Buryatia / T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Teknologier og udstyr til kemiske, bioteknologiske og fødevareindustrier": materialer fra II Vseross. Scien. Conf. studerende, kandidatstuderende og unge forskere. - Biysk, 2009. - s. 91-93.

9. Pavlova E.T. Kromatografisk separation og kvantitativ bestemmelse af bestanddelene af lægemidler ved HPLC / TE Soktoeva, T.A. Kolodin // "Problemer med bæredygtig udvikling i regionen": Materialer fra det 5. skole-seminar for unge russiske forskere. - Ulan-Ude, 2009. - s. 222-223.

10. Zhigzhitzhapova, S.V. Sammenligningsanalyse af de kemiske sammensætninger af Artemisia L., der vokser i Centralasien / S.V. Zhigzhitzhapova, T.E. Soktoeva, L.D. Radnaeva, O. Grahl-Nilsen // "Modemmetoder til dataanalyse" Syvende Vinter Simposium på Chemometrics. - Sankt Petersborg, 2010. - s. 82-83.

11. Soktoeva, T.E. Sammenligning af sammensætningen af ​​de essentielle olier af polynien af ​​slægten Artemisia L., dyrket i Centralasien / TE Soktoeva // "Miljøvenlige og ressourcebesparende teknologier og materialer": Materialer i regionen, ungdomsvidenskabelige. Conf. fra intern. deltagelse. - Ulan-Ude, 2010.-S. 109-110.

12. Zhigzhitzhapova, C.B. Æteriske olier af artemisia L. / C.B. polynia genus. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Udviklingen af ​​traditionel medicin i Rusland: Erfaring, forskning, perspektiver": materialer nauchn. Conf. fra intern. deltagelse. - Ulan-Ude, 2010. - s. 405-407.

13. Soktoeva, T.E. Sammensætningen af ​​den essentielle olie af søskende malurt Artemisia sieversiana Willd. / T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Faktiske studier af Baikal Asien": Internets materialer. Scien. Conf, - Ulan-Ude, 2010. - s. 309-312.

14. Badmaeva, E.E. Sammensætningen af ​​den æteriske olie Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess. vokser i Mongoliet / E.E. Badmaeva,

TE Soktoeva // "Ruslands økologi og tilstødende territorier": Materialer fra XV International. miljømæssige con. - Novosibirsk, 2010. - s. 325.

15. Badmaeva, E.E. Sammensætningen af ​​æterisk olie Artemisia annua / EE. Badmaeva, T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Miljøvenlige og ressourcebesparende teknologier": materialer Vseross. ungdomskonference. fra intern. deltagelse. - Ulan-Ude, 2011. -C. 156-157.

16. Soktoeva, T.E. Ekstraktion af artemisinin fra malurt årlige Artemisia annua L. / T.E. Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Prioriteter og træk ved udviklingen af ​​Baikal-regionen": Materialer fra Vth International. Scien. Conf. - Ulan-Ude, 2011. - s. 127-128.

17. Zhigzhitzhapova, C.B. Den kemiske sammensætning af Artemisia annua L. / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // "Vegetation af Baikal-regionen og tilstødende områder": materialer fra Vseross. Scien. Conf. - Ulan-Ude, 2011. - s. 152-153.

AAS atomabsorptionsspektrofotometri

fvmh absolut tørre råmaterialer

BAS biologisk aktive stoffer

GZ biologiske reserver

BH-papirkromatografi

WHO Verdenssundhedsorganisationen

HPLC-MS højtydende væskemassekromatografi

GF State Pharmacopoeia

ISC metode til hovedkomponenter

CO-standardprøve

disse tynde lagskromatografi

EZ operationelle reserver

SRM Vælg reaktionsovervågning

Forfatteren udtrykker oprigtigt taknemmelighed til studielederen, D.Sc., prof. LD Radnaeva, samt ph.d., lektor, seniorforsker Baikal Institute of Nature Management af den sibiriske gren af ​​det russiske videnskabsakademi Zhigzhitzhapova C.B., Kandidateksamen, Æres Professor Tomsk State University Ryzhova G.L. for hjælp og støtte til forberedelsen af ​​afhandlingen.

Det blev underskrevet i print 11/21/2011. Format 60x84 1/16. Offset papir. Volumen 1,5pech. l. Cirkulation 100. Ordrenummer 67.

Trykt i trykkeriet på forlaget BNTS SB RAS. 670047 Ulan-Ude, ul. Sakhyanova, 6.

Indholdsfortegnelse for Soktoevs afhandling, Tuyana Erdemovna :: 2011 :: Ulan-Ude

Kapitel 1. REVISION AF LITERATUR

Den aktuelle tilstand af forskning om undersøgelsen af ​​slægten Artemisia L.

1.1. Botaniske egenskaber ved Sivers malurt og 12. årlige malurt

1.2. Æteriske olier og naturlige azuleneplanter af slægten Wormwood

1.2.1. Den kemiske sammensætning af æteriske olier og naturlige azulene 14 planter af slægten Wormwood

1.2.2. Brug af æteriske olier af planter af slægten Wormwood i medicin

1.2. Artemisinin: opdagelse, struktur og syntese, fysisk-kemiske 31 egenskaber, mekanisme for antiplasmodium-virkning

1.3. Fedtsyre sammensætning af planter af slægten Wormwood

1.4. Fenoliske forbindelser af planter af slægten Wormwood

1.5. Den elementære sammensætning af planter af slægten Wormwood 38 KONKLUSIONER TIL KAPITELET

KAPITEL 2. FORMÅL OG METODERS KARAKTERISTIK 41 FORSKNING

2.1. Studerende objekter, prøver af råvarer - græs af Sivers malurt og 41 urter af malurt årligt

2.2. Forskningsmetoder

2.2.1. Biologiske forskningsmetoder

2.2.1.1. Anatomisk og diagnostisk undersøgelse

2.2.1.2. Ressourceforskning

2.2.2. Metoder til kvalitativ og kvantitativ bestemmelse af 43 biologisk aktive stoffer

2.2.3. Merchandising Analysis: Metoder til etablering af 50 råmaterialer af god kvalitet

2.2.4. Metoder til statistisk behandling. Den vigtigste komponent metode.

KAPITEL 3. FARMAKOGNOSTISK ANALYSE AF HERBAL HERBALIS 53 CIVERS

3.1. Mikroskopisk analyse af græs af Sivers malurt

3.2. Sibers Wormwood Lagre

3.3. Undersøgelsen af ​​de vigtigste BAS græs søskende malurt

3.3.1. Kvalitativt og kvantitativt indhold af bestanddelene 64 essentiel olie af Sivers malurt

3.3.1.1. Den kemiske sammensætning og dynamik akkumulering af æterisk olie og 64 hamazulena i græsset af Sivers malurt i forskellige områder af Buryatia

3.3.1.2. Særlige egenskaber ved ophobning af æterisk olie og chamazulen i græsset på 65 Sivers malurt i forskellige faser af planteudvikling

3.3.1.3. Akkumuleringen af ​​mindre bestanddele af græsens essentielle olie 71 Siver malurt

3.3.1.4. Funktioner af ophobning af æterisk olie og chamazulen i græsset 72 Siver malurt fra forskellige dele af planten

3.3.2. Det kvalitative og kvantitative indhold af flavonoider og tanniner i græsset i Sivers malurt

3.3.3. Fedtsyre sammensætning af græs af Sivers malurt

3.3.4. Elementær sammensætning af urtens ormestruktur årlige KONKLUSIONER TIL KAPITELET

KAPITEL 4. FARMAKOGNOSTISK ANALYSE AF HERBALTE HERBALER 83 ETÅR

4.1. Mikroskopisk analyse af urte malurt årligt

4.2. Bestand af malurt årligt

4.3. Undersøgelsen af ​​de vigtigste BAS græs malurt årligt

4.3.1. Det kvalitative og kvantitative indhold af bestanddelene af æterisk olie i urtens ormhjerner årligt

4.3.1.1. Den kemiske sammensætning og dynamik i akkumulering af æterisk olie i 92 græs af etårigt malurt fra forskellige vækststeder

4.3.1.2. Særlige egenskaber ved ophobning af æterisk olie i græs af malurt ^ årligt i forskellige udviklingsfaser og i forskellige dele af planten

4.3.2. Kvalitativ og kvantitativ bestemmelse af flavonoider græs 100 malurt årligt

4.3.3. Fedtsyresammensætning af urtens ormhjerner årlige ® ® *

4.3.4. Elementets sammensætning af urtmurtræet årligt

4.4. Udvikling af en metode til kvantitativ bestemmelse af artemisinin i 103 græs af malurt ved en årlig metode til HPLC-MS

4.4.1. Udvælgelse af betingelser for den kvantitative udvinding af artemisinin fra 103 etårigt malurt

4.4.2. Udvikling af en teknik til kvantitativ bestemmelse af artemisinin 104 ved HPLC-MS

4.4.3. Kvantitativt indhold af artemisinin i det årlige malurt fra forskellige vækststeder

4.4.4. Analyse af det kvantitative indhold af artemisinin i græsset 107 malurt årligt på forskellige udviklingsfaser og i forskellige dele af planten

KAPITEL 5. INDSTILLING AF INDIKATORERNE 111 VEDRØRENDE RAW MATERIALER

5.1. Morfometriske indikatorer for råmaterialer

5.2. Standardisering af græs søskende malurt

5.2.1. Merchandising indikatorer græs Sills malurt!

5.2.2. Standardisering af Siver malurt urt efter indholdet af 115 hamazulelen i sammensætningen af ​​æterisk olie

5.2.3. Etablering af holdbarhed af Sivers malurt græs

5.3. Standardisering af urtens ormestår årlige ^ ^ ^

5.3.1. Vareindikatorer græs sagebrush årlig * '^

5.3.2. Standardisering af urtens malurt årligt på indholdet af artemisinin

5.3.3. Etablering af plantens holdbarhed årligt

Indledning af afhandlingen om emnet "Farmaceutisk kemi, farmakognosi", Soktoeva, Tuyana Erdemovna, abstrakt

Relevans af emnet. Planter af slægten Artemisia (malurt) er lovende kilder til biologisk aktive stoffer, såsom malmstamme Artemisia dracunculus L., malurt Artemisia absinthium L., malurt Artemisia vulgaris L. er meget udbredt inden for folkemusik, traditionel medicin og fødevareindustri. Artemisia annua L., et årligt malurt, blev med succes introduceret i kultur i mange lande, og i 2001 blev anbefalet af WHO som den vigtigste kilde til artemisinin, den første linie behandling for malaria. I dag lever lande, der producerer artemisinin, ca. en fjerdedel af de globale sundhedsbehov [1, 2]. 137 biologisk aktive forbindelser blev isoleret fra det en-årige, herunder 40 sesquiterpener, 10 triterpener, 7 coumariner, 46 flavonoider, som kan danne grundlag for lægemiddeludvikling [3]. I 80'erne af det 20. århundrede forsøgte en gruppe forskere [4] at dyrke den vildt voksende del af Sovjetunionens etårige flora i ULI (Moskva). I dag udføres større værker om introduktionen af ​​første års emne på Tomsk State University. I Buryatia n. Annual er en vildt voksende art.

Sammen med den en-årige i Buryatia, er Siver malurt Artemisia sieversiana Willd. Udbredt, hvilket også er en lovende art. I græsset af P. Sievers indeholder flavonoider, æterisk olie, coumariner [5-8]. Essentiel olie af Seabera er interessant som en kilde til Chamazulene, en ikke-toksisk forbindelse med antiinflammatoriske, bakteriedræbende, regenerative effekter [9, 10].

Indtil nu har en detaljeret kemisk undersøgelse af savsmed og malurt af den årlige flora Buryatia ikke været udført som lovende kilder til biologisk aktive stoffer. Derfor er deres undersøgelse en uopsættelig opgave.

Formål: Farmakognostisk undersøgelse af Sivers malurt Artemisia sieversiana Willd. og malurt årlige Artemisia annua L. som værdifulde kilder til biologisk aktive stoffer.

For at nå dette mål er det nødvendigt at løse følgende opgaver:

1. Identificere de anatomiske og diagnostiske egenskaber ved den ovennævnte del af Sivers p. Og p. Etårig, etablere råvareindikatorer for råmaterialer, evaluere reserver og muligheden for at høste s. Etår og Sivers på Republikken Buryatiens område;

2. At studere den kemiske sammensætning af de vigtigste grupper af biologisk aktive stoffer i disse planter og bestemme deres kvantitative indhold, etablere lokalisering af æteriske olier og artemisinin i individuelle plantedele, studer dynamikken i deres akkumulering i udviklingsfaserne og bestem de optimale opsamlingsbetingelser;

3. At udvikle en metode til kvantitativ bestemmelse af artemisinin i den en-åriges antennedel

4. Bestem kvalitetsindikatorerne og standarderne for indholdet af basisk biologisk aktive stoffer, for at udvikle reguleringsdokumentation for lægematerialerråvarer - græsset i Siver malurt og græset med etårigt malurt.

Videnskabelig nyhed. De vigtigste diagnostiske egenskaber ved græsset Sivers og P. årlige blev oprettet, og de numeriske indikatorer, der var nødvendige for standardisering af råmaterialer, blev udviklet.

En undersøgelse blev foretaget af den kemiske sammensætning af Sivers græs og af etårigt græs. Indholdet af æteriske olier, flavonoider, fedtsyrer, makro- og mikroelementer blev bestemt. Flavonoider - luteolin-7-glucosid, rutin, quercetin og chryoeriol blev påvist ved HPLC-MS-metoden i disse planter. De vigtigste fedtsyrer i de undersøgte typer af malurt er palmitinsyre, linolsyre, linolensyre, 10% octadekensyre findes også i markant malurt.

Betingelserne for udvinding af artemisinin (type ekstraktionsmiddel, ekstraktionsmetode, ekstraktionstid) fra den årlige urte blev bestemt, og det blev fastslået, at maksimal ekstraktion af artemisinin opnås ved ultralyd og subkritisk CO2-ekstraktion. Ved HPLC-MS er det blevet fastslået, at den største mængde af artemisinin i den en-årige er indeholdt i blomstringsfasen i blomsterne.

Studier dynamikken i akkumulering af æterisk olie, afhængigt af udviklingsfasen og en del af planten. Den største mængde chamazulene æterisk olie p. Siversa akkumuleres i faser af spirende og blomstrende i blomsterstand.

De etablerede kvalitetsindikatorer for BAS er inkluderet i reguleringsdokumenterne.

Praktisk betydning. Reserverne og det mulige årlige indkøbsvolumen for en afvikling af Sivers og en afvikling på et år på Republikken Buryatiens område (afvikling af Sivers - fra 0,1 til 73,7 tons pr. År, en afvikling på et år fra 1,2 til 122,3 tons om året).

En teknik er blevet udviklet til kvantitativ bestemmelse af artemisinin i p. Grass ved en årlig HPLC-MS-metode. Betingelserne for prøveudarbejdelse af råmaterialer til analyse til kvantitativ bestemmelse af artemisinin er videnskabeligt begrundede.

Standardiseringen af ​​råmaterialer er blevet udført, FS-projekter er blevet udviklet - "Siver Wormwood Herbal" og "Wormwood One-Year Grass".

Graden af ​​gennemførelse. Metoder til udvælgelse af æteriske olier og mikroskopisk analyse af data på godkendte og gennemførte i Apotek Institut for den pædagogiske proces med VPO "Buryat State University» (№1 gennemførelsen af ​​loven af ​​6. september 2011). Projekter af FS på græs af Siver malurt og etårig malurt er forberedt til overvejelse.

Tilnærmelse af arbejdet. De vigtigste bestemmelser i afhandlingen blev præsenteret og diskuteret på: en videnskabelig-praktisk konference med international deltagelse "Udviklingen af ​​traditionel medicin i Rusland: erfaring, forskning, udsigter" (Ulan-Ude, 2010); 7. Winter Symposium på Chemometrics "Moderne Metoder til Data Analysis" (Saint-Petersburg, 2010); den internationale videnskabelige konference dedikeret til 15-årsdagen for Buryat State University "Faktiske studier af Baikal Asien" (Ulan-Ude, 2010); V international videnskabelig-praktisk konference "Prioriteter og træk ved udviklingen af ​​Baikal-regionen" (Ulan-Ude, 2011); X internationale videnskabelige-praktiske konference "Problemer med botanik i Sydsibirien og Mongoliet" (Barnaul, 2011); IV All-Russian Conference "Nye fremskridt inden for kemi og kemisk teknologi af plantematerialer" (Barnaul, 2009); XVI International Conference of Students, Postgraduates and Young Scientists "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV International Ecological Student Conference "Ruslands økologi og tilstødende områder" (Novosibirsk, 2010); II All-Russisk videnskabelig-praktisk konference for studerende, kandidatstuderende og unge forskere "Teknologier og udstyr i den kemiske, bioteknologiske og fødevareindustrien" (Biysk, 2009); All-russisk videnskabelig-praktisk konference "Baikal-regionen og de tilstødende territoriers vegetation" (Ulan-Ude, 2011); V Skoleseminar for unge forskere i Rusland "Problemer med bæredygtig udvikling i regionen" (Ulan-Ude, 2009); den regionale ungdoms videnskabelige-praktiske konference med international deltagelse "Miljøvenlig og ressourcebesparende teknologier og materialer" (Ulan-Ude, 2010).

Arbejdet blev udført som led i forskningsprojekter: RFBR: Nr. 08-04-90202-Monga "Studie af biogenetiske mønstre af biosyntese af biologisk aktive forbindelser af endemiske planter i Centralasien" (2008-2009), nr. 08-04-9803

Den kemiske sammensætning af planter som en indikator for tilstanden af ​​økosystemerne i Baikal-regionen "(2008-2010); tværfagligt integrationsprojekt №93 "Udvikling af forskning inden for medicinsk kemi og farmakologi som et videnskabeligt grundlag for udvikling af indenlandske stoffer"; et fælles projekt med videnskabsakademiet i Mongoliet "Indhentning af nye lipo- og nanosomale former for stoffer med naturlige råstoffer"; RFBR: № 10-03-16001-mobzros "Mobility of young scientists" (2010), №11-03-90705-mobst videnskabeligt arbejde (uddannelse) af unge russiske forskere i førende videnskabelige organisationer i Den Russiske Føderation 2011 (2011).

Publikationer. Ifølge resultaterne blev der offentliggjort 17 videnskabelige artikler, hvoraf 3 blev offentliggjort i tidsskrifter, der blev anbefalet af Den Russiske Føderations Forsvarsministeriums Højere Attestationskommission.

Til forsvaret er taget ud:

• Resultaterne af undersøgelsen af ​​den anatomiske struktur, bestandene, ægthedsprincippet hos Sivers og P., der vokser i Buryatia;

• resultater af en kemisk undersøgelse af biologisk aktive stoffer og deres sæsonhistoriske dynamik;

• Resultater af undersøgelser om standardisering af den ovennævnte del af Sivers p. Og et års s.